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CRISPR/Cas9 技术服务

技术简介

CRISPR(clustered,regularly interspaced,short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在细菌及古细菌中,CRISPR系统共分成3类,其中类和类需要多种CRISPR相关蛋白(Cas蛋白)共同发挥作用,而类系统只需要一种Cas蛋白即可,这为其能够广泛应用提供了便利条件。目前,来自Streptococcus pyogenesCRISPR/Cas9系统应用较为广泛。

Cas9蛋白(含有两个核酸酶结构域,可以分别切割DNA两条单链。Cas9首先与crRNAtracrRNA结合成复合物,然后通过PAM序列结合并侵入DNA,形成RNA-DNA复合结构,进而对目的DNA双链进行切割,使DNA双链断裂。

由于PAM序列结构简单(5’-NGG-3’),几乎可以在所有的基因中都能找到大量靶点,因此得到广泛的应用。CRISPR/Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞,是目前高效的基因组编辑系统。

通过基因工程手段对crRNAtracrRNA进行改造,将其连接在一起得到sgRNAsingle guide RNA)。融合后的RNA具有与野生型RNA类似的活力,但因为结构得到了简化更方便研究者使用。通过将表达sgRNA的原件与表达Cas9的原件相连接,得到可以同时表达两者的质粒,将其转染细胞,便能够对目的基因进行操作。

技术原理

        CRISPR/Cas9Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一种由RNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。 CRISPR 是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制。在这一系统中,crRNACRISPR-derived RNA)通过碱基配对与tracrRNAtrans-activating RNA)结合形成双链RNA,此tracrRNA/crRNA二元复合体指导Cas9蛋白在crRNA引导序列靶定位点剪切双链DNA达到对基因组DNA进行修饰的目的。我们也可以提供一个外源双链供体DNA片段(Donor)通过同源重组(HR)整合进断裂处的基因组,从而达到对基因组DNA进行修饰的目的。目前,CRISPR-Cas9系统的高效基因组编辑功能已被应用于多种模式生物,包括人、小鼠、大鼠、斑马鱼、秀丽隐杆线虫、植物及细菌。

解决方案

典君生物提供从生物信息学分析、基因编辑分子实验、细胞实验、动物模型制作的一站式技术服务,经我们优化的CRISPR/Cas9系统适用于任何基因的靶位点及哺乳动物细胞。典君生物拥有一支具有丰富CRISPR基因编辑经验的技术团队,目前可以实现包括gRNA设计、CRISPR/Cas9载体构建、细胞转染、阳性克隆鉴定、单克隆细胞培养、基因敲除细胞系构建等服务。服务完成后,我们将交付给您指定基因功能缺失的单克隆细胞株及详细的鉴定报告。

技术特点

1 操作简单,靶向精确性更高;

2 可实现对靶基因单个位点或多个位点同时敲除;

3 也可同时对多个靶基因进行敲除;

4 可应用于任何物种;

5 实验周期短,价格低;

6 拥有CRISPR/Cas9腺病毒/慢病毒系统,对分裂期和非分裂期细胞均有感染作用。

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