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miRNA靶基因预测与检测

简介

miRNAs与靶基因的3UTR结合后,一般功能主要表现为抑制mRNA的翻译,为了检测其效果,我们可以用Western Blot的方法检测靶蛋白的表达水平,也可以用qRT-PCR进行检测靶标基因的表达。但是这两种方式都不能有效地说明是miRNAs直接起作用的结果。因此为了检测miRNA靶标的有效性,构建Sensor reporter并进行活性检测,才是对miRNAs与靶基因3UTR的关系作出准确判断的方法。

服务优势

1)采用Promega公司特有psiCHECK质粒;

2)所采用的Luciferase双荧光报告系统,可以获得宽泛的线性定量范围与极高的灵敏度;

3)采用瞬时转染技术,操作简便、快速,周期短,适用于绝大多数细胞类型。

服务流程

1PCR扩增靶基因的3UTR,或直接合成结合位点序列;

2)将上述确定的靶基因DNA片段克隆至报告基因载体psiCHECK质粒;

3)克隆miRNA表达载体;

4)将报告载体与miRNA表达载体共转染293T细胞;

5)多功能酶标仪检测报告基因的表达水平;

6)数据分析,整理提交客户原始数据及项目报告;

注:为了实验的严谨性,可加入靶标基因3UTRmicroRNA预测结合区域的突变体作为对照,进一步说明问题。


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